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RAPA3G Probe qPCR Mix

簡要描述:

RAPA3G Probe qPCR Mix公司正在出售的產(chǎn)品:耐長春新堿結(jié)腸癌細胞,VCR終濃度1μg/ml ZSWIM6蛋白封閉多肽 牛鼻炎病毒型PCR檢測試劑盒 大鼠凝子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒 肌激(CK)活性比色法檢測試劑盒 卡爾維灣弧菌 E4F轉(zhuǎn)錄因子1抗體

更新時間:2024-01-12

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RAPA3G Probe qPCR Mix

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

A-PJ1026

RAPA3G Probe qPCR Mix

1ml

A-PJ1026

RAPA3G Probe qPCR Mix

5ml

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進行PCR反應(yīng)并得出準確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗:

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈式反應(yīng)由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。

二、退火或稱接合,復性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時間:

保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結(jié)合。復性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,可根據(jù)待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

赭曲霉染料法熒光定量PCR試劑盒

玻連蛋白/體外粘連蛋白ELISA試劑盒 VN/CD51+CD61免費代測試劑

阿留申病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

豬瘟病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)

促凋亡蛋白1ELISA試劑盒 APOPT1免費代測試劑

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌毒力基因PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核檢測試劑盒

皮膚淋巴細胞相關(guān)抗原ELISA試劑盒

貓附紅細胞體(貓嗜血支原體)探針法熒光定量PCR試劑盒

肺耐藥蛋白基因PCR檢測試劑盒

3蛋白ELISA試劑盒

貓冠狀病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

馬克洛菌染料法熒光定量PCR試劑盒

蛋白酪氨磷受體GELISA試劑盒

棒桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

禽傳染性支氣管炎病毒Conn型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

低氧誘導因子2ELISA試劑盒

豬鏈球菌2(SS-2)核檢測試劑盒

禽類支原體通用PCR檢測試劑盒

動力蛋白激活蛋白4ELISA試劑盒

葡萄孢菌探針法熒光定量PCR試劑盒

馬類圓線蟲PCR檢測試劑盒

多巴胺β羥化ELISA試劑盒

流感病毒H8亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

馬紅球菌PCR檢測試劑盒

多藥耐藥相關(guān)蛋白ELISA試劑盒

牛副流感病毒3型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

禽傳染性喉氣管炎病毒(AiLTV)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

泛激活樣蛋白ELISA試劑盒

曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒

類志賀鄰單胞菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

人肺炎衣原體抗體IgM(Cpn-IgM)ELISA試劑盒

皮欽德病毒PCR檢測試劑盒

諾如病毒型核檢測試劑盒

α1β糖蛋白(α1β-GP)檢測試劑盒elisa

擬枝孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒

艾美耳球蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

RAPA3G Probe qPCR Mix人催乳誘導蛋白(PIP)試劑盒ELISA

普通變形桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

石膏樣小孢子菌PCR檢測試劑盒

α2抗纖溶(α2-AP) 試劑盒 ELISA

唇飾帶線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

口蹄疫病毒A(FMDV-A)核檢測試劑盒

人補體因子H(CFH)試劑盒ELISA

葡萄狀穗霉屬通用PCR檢測試劑盒

 


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